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固相萃取仪原理及操作程序简要说明
点击次数:4372 公布日期:2018-8-23  来源:郑州宝晶电子科技有限公司

固相萃取是一种样品预处置仪器,运用液-固相色谱理论,采纳选择性吸附、洗脱的方式对样品进行富集、离别、净化处置,使样品更加纯净,从而降低样品中杂质对检测的干扰,大大提高检测的精确性。

固相萃取工作原理是使用选择性吸附与选择性洗脱的液相色谱法离别原理。较常用的方法是使液体样品溶液通过吸附剂,保留其中被测物质,再选用适当强度溶剂冲去杂质,然后用少量溶剂快速洗脱被测物质,从而抵达快速离别净化与浓缩的目的。固相萃取也能够将其近似地看作一种简单的色谱离别进程。

下面就以郑州宝晶电子科技有限公司的YGC-8数控主动固相萃取仪简单介绍固相萃取仪的操作方法及程序:

1. SPE小柱或滤膜选择

SPE 小柱或滤膜的大小与规格应视样品中待测物的浓度大小而定。对付浓度较低的体内样品, 一般应选用尽量少的固定相填料萃取较大体积的样品。

2. 活化 

萃取前先用充满小柱的溶剂冲洗小柱或用5-10ml 溶剂冲洗滤膜使SPE 填料坚持湿润, 因为填料干燥会降低样品保留值,而各小柱的干燥程度纷歧,也会影响回收率的重现性。先用甲醇等水溶性有机溶剂冲洗填料, 因为甲醇能润湿吸附剂外貌, 并渗透到非极性的硅胶键合相中, 使硅胶更容易被水润湿;然后再加入水或缓冲液冲洗,发明和样品溶剂相容的情况并提高回收率。

3. 上样 

一般可采纳以下四种方法:

 (1) 用0.1mol/L 酸或碱调节, 使pH<3或pH>9, 离心取上层液萃取;

 (2)用甲醇、乙腈等沉淀蛋白质后取上清液, 以水或缓冲液稀释后萃取;

 (3)用酸或无机盐沉淀蛋白质后取上清液, 调节pH 值后萃取;

 (4)超声15min后加入水、缓冲液, 取上清液萃取。流速应操纵为1ml/min, 流速快倒霉于待测物与固定相结合。

4. 淋洗 

反相SPE的清洗溶剂多为水或缓冲液, 可在清洗液中加入少量有机溶剂、无机盐或调节pH值。加入小柱的清洗液应不超越一个小柱的容积, 而SPE滤膜为5~10ml。

5. 洗脱 

应选用5~10ml离子强度较弱但能洗下待测物的洗脱溶剂。若需较高灵敏度, 则可先将洗脱液挥干后, 再用流动相重组残留物后进样。体内样品洗脱后多含有水, 可选用冷冻干燥法。保留能力较弱的SPE 填料可用小体积、较弱的洗脱液洗下待测物,再用极性较强的HPLC 分析柱如C18柱分析洗脱物。若待测物可电离, 可调节pH 值, 抑制样品离子化, 以增强待测物在反相SPE 填料中的保留, 洗脱时调节pH值使其离子化并用较弱的溶剂洗脱, 收集洗脱液后再调节pH值使其在HPLC分析中抵达最佳离别效果。在洗脱进程中应减慢流速,用两次小体积洗脱代替一次大体积洗脱, 回收率更高。

 

                     

 

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