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PCR实验室整体解决方案(附设施清单)
点击次数:358 颁布日期:2019-4-12  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

PCR实验室简介

Pcr实验室又叫基因扩增实验室、DNA实验室,基因检测实验室。PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称。是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段,可看作生物体外的特别DNA复制。通过DNA基因追踪系统,能快速掌握患者体内的病毒含量,其精确度高达纳米级别,精确检测乙肝病毒在患者体内存在的数量、是否复制、是否传染、传染性有多强、是否必要服药、肝功能有否异常改变能及时推断病人最适合使用哪类抗病毒药物、推断药物疗效如何、给临床治疗提供了可靠的检验依据 。

功能:能够对患者病情进行科学、精确、实时的掌控,并结合抗HBV与T细胞免疫来打破免疫耐受,阻断肝病病毒复制的疗法、有效的分解肝炎病毒,解决了乙肝病毒易变异、耐药,病毒复制模板难以治疗,人体免疫耐受状态不易打破等医学难题,能快速消除临床症状,并且有效抑制乙肝病毒复制,显著加快e抗原、抗体的血清转换速度,杀灭血液及肝细胞内的病毒,为防止再感染提供了长期保护,有效阻断和逆转肝纤维化、肝硬化进程。 

建设方案

 

1、树立样品准备区 
这个地区专门用作样品的准备,在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采纳预防措施:⑴PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不克在这个房间操作。⑵组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处置,以依据应用的需要提取DNA或RNA。⑶用于样品处置的工具不克被用作一般分子克隆的工具,也不克用作操作靶序列。⑷DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作,以防止在吸取样品时有气溶胶遗留。⑸大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。⑹管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的发生,并且管子不克用力崩开,这样会发生气溶胶。⑺任何时刻都应该穿实验服和带手套,手套要经常更换,特别在抽提进程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间,经常清洗。 
2、样品准备和RNA-PCR RNA-PCR的额外程序需要额外的样品操作,这样增加了样品之间污染的时机。为了幸免这一问题,反转录一步能够在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。 
3、树立前PCR区。 
该去专门用于准备各种反应,这个地区必须坚持洁净,并且没有来自克隆和样品准备的污染。前PCR区必须要有试剂和准备,特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。 
4、PCR实验室试剂的操作。 
⑴所用的一切溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。⑵一切PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新奇蒸馏的去离子水,用0.22μm过滤的,并且是高压灭菌。⑶在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂,在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。⑷所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满足,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。⑸一切试剂和样品准备进程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。⑹新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验⑺样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保留。 
5、在前PCR区树立PCR混合物。 
⑴能够把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保留在-20℃或4℃,在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。⑵如果你的实验室使用多套引物,以致于配制包括一切试剂的单一反应混合物不够经济,能够考虑分装保留够一天的PCR成分。⑶作为一个法则,应该保留一套阴性、弱阳性和强阳性比拟样品来分析样品配制和PCR前进程的效率和洁净程度。并且,你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。⑷阴性样品要与每组样品同时做,以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染,阴性比拟应该包括核酸以外的一切试剂。⑸当做阳性比拟时,有两个理由决议了应该使用最少数量的核酸。⑹由于必须有比拟反应,比拟模板的特性应该予以考虑。 
6、操纵污染的方法。 
已设计出很有力的酶学方法用来消除一种形式的污染—使用UNG,这一技术能有效地消除由PCR产物引起的污染。另一种操纵污染的方法是使用紫外线,这种方法不克完全消除污染问题,但能够将污染降低几个数量级。 
7、后PCR区PCR完成以后,需要分析样品并解释数据,应该留出一个专门用于反应后处置样品的地方。后PCR运动中使用的所用试剂、一次性耗材和仪器都必须是专门用于这一目的,决不克把实验室这一地区的试剂或仪器用于任何前PCR运动

应用场所

第三方医学检验所,司法鉴定机构,临床医学检验机构,刑侦技术鉴定机构,农牧业基因检测,食物行业转基因食物检测,食物药品监督所,疾控中心等

PCR实验室设施清单

(一)试剂储存和准备区
1、2-8C和-15C冰箱
2、混匀器
3、微量加样器(笼盖1-1000ul)
4、移动紫外灯(近工作台面)
5、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处置的离心管和加样器吸头(带滤心)
6、专用工作服和工作鞋
7、专用办公用品

(二)标本制备区
1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱
2、高速台式冷冻离心机
3、混允器
4、水浴箱或加热模块
5、微量加样器(笼盖1-1000ul)
6、可移动紫外灯(近工作台面)
7、超净工作台
8、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处置的离心管和加样器吸头(带滤心)
9、专用工作服和工作鞋
10、专用办公用品

如需处置大分子DNA,应具有超声波水浴仪。


(三)扩增反应混合物配制和扩增区
1、核酸扩增仪
2、微量加样器(笼盖1-1000ul)
3、可移动紫外灯(近工作台面)
4、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处置的离心管和加样器吸头(带滤心)
5、专用工作服和工作鞋
6、专用办公用品

(四)扩增产物分析区

视检验方法差别而定。基本仪器设施如下:
1、微量加样器(笼盖1-1000ul)
2、可移动紫外灯(近工作台面)
3、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、加样器吸头(带滤心)
4、专用工作服和工作鞋
5、专用办公用品

来源:济南博宇生物技术有限公司
联系电话:15552586872
E-mail:2816768617@qq.com

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